一、姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡的实验研究（论文文献综述）
文婷婷[1]（2021）在《安五脂素通过调控let-7c-3p/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌发展》文中提出本研究将人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系（A549和H460）以及A549细胞异种移植裸鼠模型作为研究对象,研究安五脂素（Anwuligan,ANW）对NSCLC生物学功能产生的影响和其发挥作用的具体分子机制,阐明其在NSCLC治疗中的重要性,重点研究了ANW对NSCLC细胞中let-7c-3p和PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响,及抑制let-7c-3p表达对于ANW抗NSCLC作用中的影响。本实验共分为3个部分:1、ANW抑制NSCLC细胞生长和转移本研究首先通过CCK-8实验检测到低于50μM的ANW对于正常肺细胞系（Beas 2B和MRC-5）无明显毒性,说明低于50μM浓度的ANW对于正常肺细胞来说是安全的。因此本研究将不同ANW（DMSO（control）、0μM（vehicle）、5μM、20μM、50μM）处理的A549和H460细胞分成五组进行实验,首先经CCK-8比色实验证实ANW处理24h即可杀伤NSCLC细胞,并且浓度越高,杀伤能力越强,说明ANW（≤50μM）对于NSCLC细胞具有选择性杀伤作用。并且进一步经Edu实验、成克隆实验以及流式细胞术细胞周期检测（PI染色）发现ANW可明显抑制NSCLC细胞系（A549和H460）的存活和增殖能力,且为浓度依赖性;划痕实验及transwell实验的结果显示20μM的ANW即可显着抑制NSCLC细胞系（A549和H460）的转移和侵袭能力,且呈浓度依赖性,收集ANW处理24h后的5组细胞进行western blot检测,结果表明ANW可减弱TGF-β诱导EMT相关标志蛋白的表达的影响,说明ANW可以延缓NSCLC的进展;顺铂是常见的肿瘤化疗药物,但其临床应用受到耐药性和毒性的限制。CCK-8比色法显示中浓度（20μM）ANW即可显着增强顺铂的抗NSCLC生长能力,细胞流式仪（AV/PI双染）检测细胞凋亡发现20μM的ANW与顺铂联合处理诱导A549和H460细胞凋亡的能力明显强于二者单独处理,收集细胞进行western blot检测,结果显示联合处理后凋亡相关蛋白（caspase3/7/9）活化也相对增强,这些结果表明ANW和顺铂联合用药可增强抗NSCLC作用。综上,ANW对NSCLC细胞的生长和转移具有明显的抑制作用,具有成为一种新的抗癌药物成分的潜力,值得进一步研究。2、ANW上调NSCLC细胞中的let-7c-3p的表达本研究在第一部分明确了ANW对NSCLC细胞的抑制作用,接下来对其作用机制进行了探究。先通过Deep Sequencing技术检测到经ANW（50μM）处理24h后A549细胞中多种mi RNA表达发生变化,其中22种mi RNAs水平变化最为明显,8种上调,14种下调,尤以let-7c-3p升高最为明显,并经q RT-PCR进一步明确ANW处理后A549和H460中let-7c-3p表达增加;本研究通过生信分析结果发现let-7c-3p主要与3-磷酸肌醇生物合成相关。众所周知,PI3K是一种胞内磷脂酰肌醇激酶,PI3K/AKT/mTOR信号通路在调节细胞周期,增殖,凋亡和自噬中起重要作用,western blot结果显示ANW（分3组:0、20、50μM）处理后,20μM和50μM的ANW可抑制A549和H460细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的磷酸化,说明ANW可调控NSCLC细胞中的PI3K/AKT/mTOR信号通路。PIK3CA是PI3K的催化亚单位,对维持PI3K的结构与功能具有重大作用。本研究预测分析PIK3CA 3’UTR序列可能是let-7c-3p的靶基因,通过双荧光酶基因报告系统检测发现let-7c-3p mimic可显着抑制PIK3CA3’UTR序列荧光素酶活性,对PIK3CA 3’UTR的突变序列无影响,此外,scramble对PIK3CA 3’UTR序列的荧光素酶活性无影响,说明let-7c-3p的确可以与PIK3CA 3’UTR序列结合,并且进一步通过q RT-PCR、western blot检测发现let-7c-3p可以直接抑制PIK3CA表达。重要的是,本研究构建并获取了携带PIK3CA基因的慢病毒,根据不同的转染物质以及慢病毒感染情况,分别将A549和H460细胞分成四组:mimic NC、let-7c-3p mimic、let-7c-3p mimic+vector和let-7c-3p+PIK3CA,通过western blot检测发现let-7c-3p+PIK3CA可以减弱let-7c-3p对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达的抑制作用。为了研究let-7c-3p在NSCLC细胞中的生物学功能,我们将let-7c-3p mimic、scramble转染到A549和H460细胞中,外加空对照（control组）,进行克隆形成实验、Edu荧光检测,证实过表达let-7c-3p可以抑制A549细胞和H460细胞的生长,并且通过划痕实验和transwell实验证明过表达let-7c-3p可以抑制A549细胞和H460细胞的侵袭和转移。综上,本部分研究发现ANW处理A549和H460细胞后可上调let-7c-3p,并且let-7c-3p的靶基因为PIK3CA 3’UTR序列,可调控PI3K/AKT/mTOR信号通路,过表达let-7c-3p可抑制NSCLC的发生和发展。3、let-7c-3p是ANW发挥抗NSCLC作用的必须靶点那么let-7c-3p是否是ANW发挥抗癌作用所必须的呢?在这部分的研究中,我们将let-7c-3p inhibitor及inhibitor NC分别转染到A549和H460细胞中,以此分为两组:inhibitor组和inhibitor NC组。随后用ANW（50μM）处理细胞,进行实验。在第一部分实验研究中,我们证实ANW对NSCLC细胞具有抑制生长、转移、侵袭以及促凋亡的作用。因此本部分研究首先通过CCK-8比色法实验、成克隆实验、Edu实验、细胞周期检测证实抑制let-7c-3p可减弱ANW对NSCLC细胞存活和增殖能力的抑制作用。接着通过划痕实验和Transwell实验证实抑制let-7c-3p可减弱ANW对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的抑制作用。最后通过细胞流式实验（AV/PI双染）检测两组细胞凋亡的数量,结果显示抑制let-7c-3p表达可减弱ANW对NSCLC促凋亡作用。收集两组细胞后进行western blot检测,结果显示抑制let-7c-3p表达后,可以逆转ANW对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白磷酸化水平的影响,并且抑制let-7c-3p表达,可以减弱ANW对凋亡相关蛋白caspase3/7/9以及对EMT相关标志蛋白的影响。本研究还建立了A549细胞的裸鼠异种移植模型,按照对裸鼠进行腹腔注射及瘤内注射不同药物,将其分为四组:control组、ANW组、ANW+inhibitor NC组和ANW+let-7c-3p inhibitor组,裸鼠肿瘤体积监测及肿瘤称重结果显示,与control组相比,ANW处理能有效地抑制肿瘤生长,而抑制let-7c-3p表达可消除ANW对NSCLC的抑制作用（P<0.01）,即本研究进一步通过体内实验证实了ANW通过上调let-7c-3p发挥抗肿瘤作用,即let-7c-3p是ANW作用NSCLC的靶标。并且对安乐死后裸鼠的肝、肾、心的切片进行HE染色后分析表明ANW对于正常组织细胞无明显毒性,说明作用于机体是较为安全的。综上,本部分研究通过体内和体外实验证实了let-7c-3p在ANW抑制NSCLC发生发展过程中的重要作用,为抗NSCLC的研究提供了新靶标,为NSCLC的治疗提供了新思路。
翟雨晴[2]（2021）在《大豆苷元诱导肺癌A549细胞凋亡及其相关机制的研究》文中研究指明肺癌是一种对全世界人类健康都具有极大威胁的恶性肿瘤疾病,癌症数据分析表明,每年死于肺癌的肿瘤患者约有176万人。大豆苷元（daidzein,DAI）是一种广泛存在于大豆产品中的天然异黄酮类化合物,因其具有良好的药效药理机制而受到各国学者关注,但其对于肺癌的防癌抗癌作用机制尚不清晰。因此,本实验以肺癌细胞作为体外研究模型,从细胞及分子水平上对DAI的抗癌机制进行研究。本研究通过研究DAI对3种肺癌细胞的杀伤效应以及3种正常细胞的毒副作用,利用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法进行了检测;采用荧光显微镜观察法和流式细胞术（FCM）对DAI的诱导凋亡进行检测;通过FCM对DAI在肺癌细胞内的周期阻滞作用进行检测;通过FCM对DAI在肺癌细胞内活性氧（ROS）水平的调控作用进行检测;通过细胞划痕实验对DAI在肺癌细胞的抑制迁移作用进行检测;通过蛋白质免疫印迹法（western blot）对细胞凋亡、ROS水平、周期阻滞、迁移抑制以及相关信号通路蛋白表达量情况进行检测。结果显示,与阳性对照5-FU组相比,DAI对3种肺癌细胞具有杀伤作用,且对3种正常细胞表现出的毒副作用并不显着;随着DAI处理A549细胞时间的不断增加,细胞出现明显的皱缩变圆的凋亡形态、早晚期凋亡数量的总和不断增加并显着降低了A549细胞内线粒体膜电位,此外,DAI还能够显着降低凋亡相关蛋白Bcl-2/Bad的比例,释放细胞色素C（Cytochrome C,cyto-c）,介导caspase-3和PARP被活化,最终使细胞发生线粒体依赖性凋亡;DAI可通过促进周期蛋白p21、p27的表达,抑制周期蛋白p-AKT、CDK2/4/6和cyclin D1/E的表达,使细胞在G0/G1期发生周期阻滞;DAI能够上调肺癌A549细胞中ROS水平,进而激活JNK、p38信号通路,抑制ERK,STAT3和NF-κB信号通路,使A549细胞发生凋亡;DAI在处理A549细胞后,其迁移作用明显地受到了抑制,且呈时间依赖性,并通过TGF-β信号通路有效抑制肺癌A549细胞发生迁移。综合以上结果,DAI对3种肺癌细胞具有杀伤作用,且能够使肺癌A549细胞内ROS水平升高,进而调控MAPK,STAT3和NF-κB信号通路,使肺癌A549细胞发生线粒体依赖性凋亡和细胞周期阻滞,并通过调控TGF-β信号通路抑制细胞迁移和侵袭。本研究为研制出一种安全有效的防治肿瘤功能因子提供新的思路和理论依据。
姚晓云,钭方芳[3]（2020）在《凋亡在中医药治疗肝癌中的作用研究》文中研究说明肝癌（liver cancer）是世界上最流行的十大恶性肿瘤之一,每年发病呈上升趋势。尽管目前在临床上治疗肝癌以手术治疗为首选治疗方法,但是仅30%左右的患者有机会适合手术,相当一大部分患者在确诊时已属于中晚期,丧失手术机会,而且术后5年的复发率可以高达到70%。因此采用非手术治疗方法是当前治疗肝癌的重要研究方向。祖国的传统中医学采取健脾理气、祛邪扶正、化瘀散结等治疗方法改善肝功能,提高生活质量,延长生存期,并针对局部肝肿瘤行中药解毒治疗,所以发掘高效低毒并具有抑癌活性的抗肿瘤中药和阐明其相关机制已成为学者们的研究热点[1]。目前大量研究证实中药是通过抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制端粒酶活性、抑制肝癌血管
张敏[4]（2020）在《姜黄素对非小细胞肺癌细胞活性及上皮间质转化的影响》文中研究说明目的:研究姜黄素对非小细胞肺癌（non small cell lung cancer,NSCLC）细胞活性的影响,和对 NSCLC 上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）的作用及其可能的作用机制。方法:1.通过MTT试验,检测三种非小细胞肺癌细胞HCI-H1299、A549和YTMLC-90在经过不同浓度的姜黄素处理后,测量其各自的OD值,与空白对照组（未经姜黄素处理的）相比较,观察姜黄素对NSCLC细胞活性的影响。2.通过倒置显微镜观察经过CoCl2诱导的三种NSCLC细胞与未经CoCl2诱导的三种NSCLC细胞其各自的细胞形态差异,初步构建EMT模型。将CoCl2诱导后的三种NSCLC细胞分成两组,观察组经过姜黄素处理,对照组未经过姜黄素处理,通过Transwell侵袭实验、划痕实验,比较两组的细胞侵袭抑制率及转移侵袭能力。3.把经过CoCl2诱导发生EMT的NSCLC细胞经过姜黄素处理72h,作为观察组。把未经CoCl2诱导的NSCLC细胞作为对照组1,把经过CoC12诱导发生EMT的但未经姜黄素处理的NSCLC细胞作为对照组2,通过western blot、RT-PCR试验检测姜黄素对CoCl2诱导的NSCLC细胞EMT的作用。结果:1.姜黄素以剂量依赖方式及时间依赖方式显着抑制三种NSCLC的细胞活性。自1μmol/L 至 100μmol/L 的六种浓度（1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,50μmol/L,100μmol/L）的姜黄素对三种NSCLC细胞作用24h、48h、72h的细胞活性抑制率均与对照组比较均有极显着的差异（p<0.05）。6种浓度的姜黄素对NSCLC细胞的抑瘤率之间的差异也具有统计学意义（p<0.05）。其中100μmol/L姜黄素对NCI-H1299细胞、A549腺癌细胞、YTMLC-90鳞癌细胞作用72h的抑制率分别为82.44%（P=0.000）、86.47%（P=0.000）、85.70%（P=0.000）。2.200μmol/L的氯化钴处理后的NSCLC细胞,细胞轮廓模糊不清,细胞显着发生梭型变化,细胞间距离较远,部分细胞开始脱壁。说明氯化钴处理后的NSCLC细胞发生EMT转变,形成了具有间质特征的细胞。3.姜黄素能显着抑制三种发生EMT转化的NSCLC细胞的侵袭、迁徙能力。100μmol/L的姜黄素对NCI-H1299细胞、A549腺癌细胞、YTMLC-90鳞癌细胞处理24h后,与不加姜黄素的对照组比较,侵袭抑制率分别为60.77%,59.02%,58.41%。4.姜黄素能显着上调三组EMT化NSCLC细胞的E-钙粘蛋白表达,显着下调其N-钙粘蛋白、Vimentin蛋白、MMP-2、MMP-9、MMP-14、Snail 蛋白、Twist 蛋白的表达,差异均具有统计学意义（P均<0.05）。说明姜黄素能逆转NSCLC细胞的EMT化。结论:1.姜黄素对NSCLC细胞HCI-H1299、A549和YTMLC-90的细胞活性有较强的抑制作用,作用呈剂量依赖及时间依赖性。2.姜黄素能抑制EMT化的HCI-H1299、A549和YTMLC-90细胞的侵袭、迁徙能力。3.利用CoCl2诱导NSCLC细胞发生EMT的模型构建成功。4.姜黄素能抑制NSCLC细胞的EMT,其机制可能是通过调节EMT相关基因的表达量（上调 E-cadherin 表达,下调 N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9、MMP-14、Snail及Twist表达）来实现的。
范冰冰[5]（2020）在《赤芍总苷抗肝肿瘤药效物质分析及作用机制研究》文中研究表明目的赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veichii Lynch的干燥根。味苦,性微寒,归肝经,有清热凉血、散瘀止痛的功效。用于热入营血,温毒发斑,吐血衄血,目赤肿痛,肝郁胁痛,经闭痛经,症瘕腹痛,跌扑损伤,痈肿疮疡等症。赤芍总苷具有多种药理作用,如抗血栓、抗氧化、抗肿瘤、抗内毒素、保护神经系统和心脏等作用。本课题对赤芍的有效组分赤芍总苷进行提取、纯化及药效筛选研究,采用UPLC-QTOF-MS等现代分析仪器和方法对赤芍总苷的化学成分进行研究;采用网络药理学研究方法,利用疾病靶点数据库、Swiss Target Prediction、SEA等网络数据库平台的大数据资源,揭示赤芍总苷治疗肝癌所调控的靶点及信号通路。通过H22荷瘤肝癌小鼠模型及体外Hep G2细胞模型,开展赤芍总苷抗肿瘤体内及体外药理、药效学研究,明确赤芍总苷是否具有抗肝肿瘤作用;并从细胞周期、凋亡、相关基因、蛋白角度及对细胞色素P450酶不同亚型活性及基因水平的影响对赤芍总苷发挥抗肝肿瘤作用的机理进行研究;通过大鼠血清中肝损伤、氧化应激、线粒体损伤指标的含量变化,探究赤芍总苷是否引起大鼠肝脏毒性。本研究明确赤芍总苷具有抗肝肿瘤作用,并从多角度阐释其作用机制,为赤芍总苷的临床应用及进一步开发利用提供实验依据和理论基础。方法1.采用紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法,通过L9（34）正交试验设计,以液料比、提取时间、提取次数为考察因素,以芍药苷、赤芍总苷、出膏率的综合评分为评价指标,筛选赤芍总苷最佳提取工艺;采用紫外-可见分光光度法,结合大孔树脂技术,通过静、动态吸附与解吸试验,筛选赤芍总苷的最佳纯化工艺。采用MTT法,通过肝癌Hep G2细胞增殖抑制率比较赤芍、赤芍总苷体外抗肝肿瘤作用。2.采用UHPLC-Q-TOF-MS技术,结合对照品、文献、相关数据库信息比对的办法,对赤芍总苷化学成分进行研究;采用分子网络研究方法,构建赤芍总苷分子离子可视化网络图,结合质谱相关信息,全面表征赤芍总苷成分。3.采用体外药效MTT法,以细胞增殖抑制率为评价指标,开展赤芍总苷对肝癌Hep G2细胞增殖影响的研究;通过建立H22肝癌荷瘤小鼠模型,以抑瘤率、脏器指数、瘤体病理切片及血清中细胞因子ALT、AST、FAS、FASL、IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量为考察指标,开展赤芍总苷体内抗肝肿瘤药效学研究。4.采用网络药理学研究方法,利用TCMSP、SEA及Swiss Target Prediction网络数据库平台的大数据资源,挖掘赤芍总苷成分调控靶点基因信息;利用Drugbank、Dis Ge NET、及TTD数据库,查找肝癌相关靶点,从而得到赤芍总苷成分调控肝癌的生物学靶点;采用STRING等数据库,得到靶点之间蛋白互作网络图,探讨靶点之间的相互关系,并通过对靶点进行GO基因功能注释分析,明确赤芍总苷成分参与调控肝癌生物过程、细胞组成和分子功能;进而利用KEGG数据库对靶点进行信号通路富集分析,从大数据方面揭示赤芍总苷治疗肝癌所调控的靶点及信号通路。5.利用流式细胞仪,采用Annexin V-FITC/PI双染色法,开展赤芍总苷对肝癌Hep G2细胞凋亡影响的研究;采用PI单染色法,开展赤芍总苷对肝癌Hep G2细胞周期影响的研究。6.采用实时荧光定量q RT-PCR技术,检测经赤芍总苷作用于肝癌Hep G2细胞后,细胞中相关基因的表达量;采用Western Blot技术,检测经赤芍总苷作用于肝癌Hep G2细胞后,细胞中相关蛋白的表达量,分别从基因及蛋白水平阐释赤芍总苷抗肝肿瘤作用机制。7.通过ELISA法检测大鼠肝脏中细胞色素P450亚酶CYP1A2,CYP3A4,CYP2D6,CYP2C9,CYP2E1活性,采用实时荧光定量q RT-PCR技术检测CYP1A2,CYP3A2,CYP2D1,CYP2C11,CYP2E1 m RNA水平的表达,考察赤芍总苷对细胞色素P450酶不同亚型的影响。8.通过ELISA法检测大鼠血清中ALT、AST、ALP及γ-GT的含量变化,探究赤芍总苷对肝脏组织的损伤程度;通过ELISA法检测大鼠血清中SOD、MDA及GSH的含量变化,探究赤芍总苷对肝脏组织氧化损伤的程度;通过ELISA法检测大鼠血清中Na+-K+-ATPase的含量变化,探究赤芍总苷对肝脏组织线粒体的损伤程度。结果1.赤芍总苷的最佳提取工艺为8倍量30%乙醇,回流提取2次,每次2 h;赤芍总苷的最佳纯化工艺为选用HPD-700大孔吸附树脂,上样生药浓度为0.1g/m L,树脂比上柱量为0.3g/m L（原药材/湿树脂）,2BV水除杂,5BV 30%乙醇洗脱,即得赤芍总苷化学物质组分。赤芍、赤芍总苷作用于肝癌Hep G2细胞的增殖抑制率分别为69.66%、66.00%。2.采用UHPLC-Q-TOF-MS技术,经正离子检测模式,经对照品、文献与相关数据库信息确定芍药苷、苯甲酰芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷;比对推测出芍药内酯苷异构体、毛蕊异黄酮苷、牡丹皮苷E、没食子酰芍药苷或异构体构建赤芍总苷的分子可视化网络,共找到5个分子网络成分簇,其中一个分子簇为芍药苷及其相关化合物。3.利用TCM-SP、SEA及Swiss Target Prediction网络数据库平台,挖掘出赤芍总苷成分共调控139个潜在靶蛋白。利用Drugbank、Dis Ge NET、及TTD数据库,共找到5727个癌症相关靶点。通过VENNY软件对赤芍总苷各成分靶蛋白与肝癌潜在靶点进行映射,共得到99个交集靶点,主要包含IL-2、Bcl-2、TNF、PTEN等。通过靶点之间蛋白互作网络图,明确靶点之间的相互关系,并通过对靶点进行GO基因功能注释分析,明确赤芍总苷成分在生物过程方面主要富集于细胞增殖的正调控、凋亡过程的负调控、MAPK级联、炎症反应的负性调节等;在细胞组成方面主要富集于线粒体、细胞外间隙、死亡诱导信号复合物等;在分子功能方面主要富集于一氧化氮合酶调节活性、蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶活性、生长因子活性等各种蛋白酶活性。KEGG通路富集分析结果显示有84条通路参与到赤芍总苷作用于肝癌细胞的过程,主要包括MAPK、PI3K/Akt、VEGF、肿瘤坏死因子、癌症中心碳代谢等信号通路。4.体外药效实验结果显示,赤芍总苷1mg/m L给药浓度作用于肝癌Hep G2细胞24h,36h,48h的抑制率分别为66.00%、72.52%、74.10%,IC50值分别为0.71、0.57、0.52mg/m L;体内药效实验结果显示,环磷酰胺组、赤芍总苷低、中、高剂量组的抑瘤率分别为57.61%、23.06%、36.64%、48.13%,除赤芍总苷低剂量组,肿瘤的抑制作用均超过30%（中药的瘤重抑制率>30%,评定药物具有抑瘤作用）,符合相关要求。5.与模型组比较,赤芍总苷高、中剂量组血清中ALT、AST、FAS、FASL的含量显着降低、IL-2的含量显着升高,均有显着性差异（p<0.01或p<0.05）,赤芍总苷各剂量组血清中IFN-γ、TNF-α的含量显着降低,均有显着性差异（p<0.01）。6.赤芍总苷作用于肝癌Hep G2细胞36h,低、中、高剂量组的凋亡率分别为11.7%、16.9%、22.9%;与模型组比较,赤芍总苷中剂量组肝癌Hep G2细胞G2/M期的比例降低。7.赤芍总苷作用于肝癌Hep G2细胞36h后,与模型组比较,赤芍总苷组细胞中Akt、Bcl-2、PI3K、MEK、ERK m RNA和蛋白的水平均不同程度降低,均有显着性差异（p<0.01）,PTEN、Bax m RNA的水平均不同程度升高,均有显着性差异（p<0.01）。8.与空白组比较,赤芍总苷组CYP1A2活性显着增强,有显着性差异（p<0.01）,CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9和CYP2E1活性没有显着性变化;与空白组比较,赤芍总苷组CYP1A2 m RNA水平显着升高,有显着性差异（p<0.01）,CYP3A2,CYP2D1,CYP2C11和CYP2E1 m RNA水平没有显着性变化。9.与空白组比较,赤芍总苷组大鼠血清中ALT、AST、ALP、γ-GT、SOD、MDA、GSH及Na+-K+-ATPase的含量没有显着变化。结论1.本课题优化了赤芍总苷的提取纯化方法,其工艺简单且操作方便,为赤芍总苷的后续药效研究奠定了一定基础。2.采用UHPLC-Q-TOF-MS技术、构建赤芍总苷化学成分网络,能够全面表征赤芍总苷成分,并能呈现成分之间的关系,为其开发利用及药效研究奠定实验基础。3.采用网络药理学研究手段,挖掘赤芍总苷成分调控肝癌的生物学靶点,通过蛋白网络互作分析、基因功能注释分析、靶点调控通路分析等,实现赤芍总苷抗肝肿瘤作用机制的快速、系统分析,发现赤芍总苷抗肝癌作用可能与PI3K/Akt、MAPK等信号通路相关。4.赤芍总苷对Hep G2肝癌细胞增殖有抑制作用,其作用机制是通过诱导Hep G2细胞凋亡、降低G2/M期细胞的比例,扰乱细胞正常分裂状态达到抑制作用。5.赤芍总苷能够减轻肝脏损伤程度,对肝脏具有一定的保护作用。6.赤芍总苷发挥抗肝肿瘤作用可能与抑制Hep G2细胞的增殖、诱导其凋亡,调控PI3K/Akt及MEK/ERK信号通路有关。7.赤芍总苷可能通过诱导CYP450酶亚型CYPl A2的活性发挥抗肝肿瘤作用。8.赤芍总苷在一定剂量范围内及一定给药时间内,不影响肝脏的功能,没有肝毒性,值得进一步深入研究。
邓俊刚[6]（2019）在《席夫碱—过渡金属配合物的合成及抗肿瘤活性和机制研究》文中认为本文通过设计和改造合成了一系列酰腙类席夫碱和缩氨基硫脲配体,并与过渡金属配位合成了一系列新的配合物,使用红外光谱、核磁共振、质谱、元素分析及X-射线单晶衍射技术对其进行表征。MTT法研究了配体及配合物对肿瘤细胞的抑制率,流式细胞仪研究了配合物对肿瘤细胞周期的影响及诱导肿瘤细胞凋亡的情况;ICP-MS、荧光倒置显微镜、紫外-可见光谱、荧光光谱、蛋白印迹法、琼脂糖凝胶电泳、TRAP分析和分子对接模拟分别用于研究了配合物在肿瘤细胞的分布、配合物与DNA的相互作用、配合物对周期和凋亡相关蛋白及对端粒酶活性的影响,并使用3D细胞球模拟体外肿瘤体来研究配合物对肿瘤体的影响,获得了多个活性较好的席夫碱金属配合物。一、为筛选具有较高抗肿瘤活性的席夫碱过渡金属配合物,本论文基于吡啶苯甲酰腙进行结构优化,合成了吡啶醛苯甲酰腙（L1）、喹啉醛苯甲酰腙（L2）、萘甲醛苯甲酰腙（L8-12）和水杨醛苯甲酰腙（L13-17）,并通过巯基替代席夫碱中羰基合成了吡啶醛缩氨基硫脲配体（L8-12）,使用溶液法将以上配体与过渡金属离子鳌合配位合成了配合物C1-C21;X-单晶衍射结果显示所有配合物均为单核分子,铜金属配合物C1和C4中的中心铜（Ⅱ）离子通过与配体L1和L2上的N原子、杂环N原子和羰基O原子进行三齿鳌合配位;铜（Ⅱ）-缩氨基硫脲配合物C7-C11的中心铜（Ⅱ）离子与氨基硫脲配体L3-7中的N原子、杂环N原子和巯基S原子进行三齿鳌合,而配合物C10和C11的中心铜（Ⅱ）离子还与一个甲醇分子鳌合形成五配位模式;Pt配合物C2和C5的中心Pt（Ⅱ）离子通过与配体L1和L2上的两个N原子进行双齿鳌合;Ru配合物C3和C6的中心Ru（Ⅱ）离子与通过配体L1和L2上的N原子和羰基O原子形成双齿配位;Pt配合物C12和C13的中心Pt（Ⅱ）离子通过与配体L8和L9上的N原子和羰基O原子进行双齿鳌合,另外与一个氯离子和一个二甲基亚砜分子鳌合,形成平面四边形;Pt配合物C14、C15和C16的中心Pt（Ⅱ）离子通过与配体L10、L11和L12上的N原子和苯环上的去氢O原子进行双齿鳌合,另外与一个氯离子和一个二甲基亚砜分子鳌合,形成平面四边形;配合物C17、C18、C19和C20的中心Pt（Ⅱ）离子通过与配体L13-L16上的N原子和羰基O原子进行双齿鳌合,另外与一个氯离子和一个二甲基亚砜分子鳌合,形成平面四边形;Pt配合物C21的中心Pt（Ⅱ）离子通过与配体L17上的N原子和苯环上的去氢O原子形成双齿鳌合,另外与一个氯离子和一个二甲基亚砜分子鳌合,形成平面四边形。这些配合物在配位模式和分子结构上有一定差异,可能会导致其生物活性的差异。二、使用MTT法检测了配体及配合物对肿瘤细胞的抑制率。结果显示,除缩氨基硫脲配体L4-7对肿瘤细胞有较高的抑制率（52.27%-76.49%）外,其他配体对肿瘤细胞的抑制率都较低（<40%）,对缩氨基硫脲配体L3的N-4进行结构修饰后的配体L4-7对肿瘤细胞的抑制率大大增强;通过配体L1和L2分别与三种不同的金属离子形成配位得到配合物C1-C6,其对肿瘤细胞的抑制率存在明显差异,其中Cu（Ⅱ）配合物C1和C4表现出相对较高的活性,对MGC80-3细胞的活性最好,IC50值分别为（22.02±1.83）μM和（15.68±1.29）μM,而Pt（Ⅱ）配合物C2和C5对MGC80-3细胞的IC50值>40μM,Ru（Ⅱ）配位合物对人胃癌细胞系MGC80-3细胞的IC50值>50μM;ICP-MS检测配合物C1-C6作用于1×106的MGC80-3细胞后细胞中三种金属的总量,结果显示细胞中铜的总量分别为（3.87±0.22nmol Cu/106cells）（C1）和（7.32±0.22 nmol Cu/106cells）（C4）,检测到细胞中Pt的总量分别为（2.98±0.32 nmol Pt/106cells）（C2）和（4.68±0.42 nmol Pt/106cells）（C5）,检测到细胞中Ru的总量分别为（0.042±0.012 nmol Ru/106cells）（C3）和（0.044±0.003 nmol Ru/106cells）（C6）,Ru配合物相对Cu和Pt配合物被吸收进入细胞的量较少,可能是导致配合物C3和C6活性低原因;2-吡啶缩氨基硫脲配体及其铜配合物对MGC80-3细胞和SK-OV-3细胞具有较高的抑制能力,其中配体L3及其配合物C7对MGC80-3细胞的IC50值分别为（19.04±0.43）μM和（12.11±0.82）μM,通过在N-4位引入苯环（C8）、或使N-4形成哌啶环（C9）或吡咯烷环（C11）,配合物吸收进入肿瘤细胞的的量明显增高,配合物对MGC80-3细胞的活性提高几倍。而在N-4处引入两个甲基后的配合物C10对MGC80-3细胞的细胞毒性比C7增加14倍多,结果说明对N-4位的修饰能很好的改变配体及其配合物的活性;选用羟基、烃基或卤素取代苯甲酰腙苯环上的氢前后得到的Pt（Ⅱ）配合C12-C16对MGC80-3细胞的抑制率高于其他肿瘤细胞,其IC50分别为（7.18±0.58）μM、（10.64±0.87）μM、（5.22±0.70）μM、（4.38±0.38）μM和（13.07±0.31）μM,低于顺铂的IC50（17.87±0.35）μM,以异丙基对位取代的配合物C15活性最好;以卤素或甲基取代水杨醛苯环上的氢原子后合成得到酰腙配合物C18-C21,配合物显示出对肿瘤细胞有良好的活性,IC50值在5.67-18.64μM范围内,比未修饰前的配合物C17的细胞毒性提高了(IC50值在15.41-27.76μM范围),配合物C17-C21对A549细胞和A549cisR细胞显示出相同的活性,其中以溴离子取代的C19对这两株细胞的活性最好,IC50值分别为（8.03±0.26）μM和（8.07±0.28）μM,优于顺铂对A549细胞和A549cisR细胞的活性,IC50值分别为（20.25±0.74）μM和（49.24±0.57）μM,表明配合物C19与顺铂无交叉耐药性。实验表明,通过结构修饰和改造后,可增加肿瘤细胞对配合物吸收,增强活性。三、流式细胞术检测配合物诱导肿瘤细胞凋亡的情况的结果显示:配合物C7和C10能诱导MGC80-3细胞发生晚期凋亡,凋亡百分比为22.76%和32.75%;配合物C12-C16明显诱导MGC80-3细胞发生早期凋亡,凋亡百分比为36.66%、30.90%、42.85%、71.45%和22.79%;配合物C17和C19能诱导A549cisR细胞发生早期凋亡,凋亡百分比为38.97%和45.07%;另外流式细胞术检测到配合物C7能将MGC80-3细胞周期阻滞在G1期,而配合物C10、C12-C16将MGC80-3细胞周期阻滞在S期,配合物C17和C19将A549cisR细胞周期阻滞在S期,配合物都引起了细胞内线粒体膜电位（Δψm）的降低,继而导致肿瘤细胞的凋亡;显微镜下观察到以上配合物都能引起细胞内活性氧（ROS）的产生,配合物C17和C19能导致A549cisR细胞形态的改变并抑制细胞迁移,此外在体外还能抑制3D肿瘤细胞球的生长。四、通过模拟分子对接、紫外-可见光谱、荧光光谱、琼脂糖凝胶电泳、蛋白印迹实验（Western Blot）、流式细胞术和TRAP分析研究配合物的抗肿瘤细胞作用机制,结果显示配合物可通过多个途径诱导细胞凋亡。1、紫外-可见光谱实验显示配合物C10、C15、C17和C19溶液中加入CT-DNA导致配合物的吸收峰都发生了不同程度的减色效应,证实配合物通过插入与CT-DNA螺旋结合;荧光光谱实验显示配合物C10、C15、C17和C19可竞争取代EB-DNA中EB引起溶液荧光强度的减弱;琼脂糖凝胶电泳结果显示Cu（Ⅱ）配合物C7和C10对DNA的作用比Pt（Ⅱ）配合物C12、C15、C17和C19弱,只有配合物C10高剂量（250μM）时显示对DNA的作用比较明显,而Pt（Ⅱ）配合物C12、C15、C17和C19在较低的剂量（10μM）下对DNA有明显的作用;分子对接模拟结果显示配合物能嵌入DNA分子中,以氢键与DNA发生相互作用,从而导致DNA损伤,DNA损伤的可导致细胞周期的阻滞,这与流式细胞术检测到的配合物对细胞周期影响的结果相符;Western Bolt法检测配合物对周期相关蛋白影响的结果显示:配合物C7和C10能明显抑制细胞周期蛋白CyclinA、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK2和周期调控因子Cdc25A的表达,并能显着上调抑癌基因p21和p27的表达;配合物C12-C16可不同程度地抑制CyclinA和CDK2的表达,并上调p27的表达,配合物C13-C16能显着上调抑癌基因p21的表达;配合物C17和C19抑制CyclinA和CDK2存在剂量相关性,高剂量时显着抑制CyclinA和CDK2的表达,并能显着上调p21的表达。实验证实合成的金属配合可作用于DNA,并通过调节周期相关蛋白的表达对细胞周期产生影响。2、线粒体是多数金属配合物作用的靶点之一,流式细胞术检测结果显示线粒体膜电位能被明显下调;Western Bolt实验检测配合物对凋亡相关蛋白的影响,结果显示配合物C10能明显抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促凋亡蛋白Bad和Bax的表达被上调,细胞色素C和凋亡酶激活因子Apaf-1的表达也明显上调;配合物C12-C16对Bcl-2和Bax表达的影响不一致,其中配合物C12-C15能明显抑制Bcl-2的表达,配合物C14-C16显着上调促凋亡蛋白Bax的表达,并导致细胞色素C的释放;配合物C17和C19在高剂量时明显抑制Bcl-2和Bcl-xL的表达并上调Bax的表达,细胞色素C在高剂量时表达量明显增加;使用流式细胞仪检测Caspase-3/9的表达,结果显示配合物C7、C10、C12-C16、C17和C19能不同程度的激活Caspase-9的表达,并引起Caspase-3被激活。该实验证实配合物可作用于线粒体相关蛋白,诱导线粒体膜电位的降低,激活凋亡执行因子导致细胞凋亡。3、Western Blot实验显示配合物C7、C10、C12-C16、C17和C19对原癌基因c-myc和端粒酶逆转录hTERT表达的抑制很显着,并导致细胞中端粒酶活性的降低;端粒酶活性检测显示配合物C7、C10、C12-C16、C17和C19不同程度地抑制肿瘤细胞中端粒酶的活性。抑制肿瘤细胞端粒酶的活性也是诱导其凋亡的路径之一。
任静[7]（2019）在《姜黄素提高紫杉醇对A549细胞的敏感性及减轻肝损伤的实验研究》文中研究指明目的:针对紫杉醇化疗非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,简称NSCLC）产生的耐药性及其对正常肝细胞产生的损伤作用,本实验研究姜黄素（Curcumin）及紫杉醇（Paclitaxel）单独或联合用药对非小细胞肺癌细胞增殖、调亡的影响,并探究姜黄素提高紫杉醇对非小细胞肺癌化疗敏感性的作用及其机制,同时进一步探讨姜黄素对紫杉醇所致肝损伤的影响。方法:（1）分别在体外培养非小细胞肺癌细胞A549细胞和人正常肝细胞L-02细胞,传代培养待细胞处于对数生长期时,按如下分组情况进行药物干预48 h:空白对照组（不加任何药物,仅有细胞培养液）、姜黄素组（依次加入2.5、5、10、20、40μmol/L的姜黄素溶液,仅A549细胞设置该组）,紫杉醇组（依次加入0.06、0.125、0.25μmol/L的紫杉醇溶液）,联合用药组（5μmol/L的姜黄素+0.06μmol/L的紫杉醇溶液、5μmol/L的姜黄素+0.125μmol/L的紫杉醇溶液、5μmol/L的姜黄素+0.25μmol/L的紫杉醇溶液）,应用CCK-8法检测两种细胞各分组的细胞增殖情况,并筛选出两药联合用药时适当的浓度（本实验选用5μmol/L的姜黄素+0.125μmol/L的紫杉醇溶液）,用于后续实验;（2）按照上述筛选出的姜黄素与紫杉醇浓度,再次将实验分为4组:空白对照组（不加任何药物,仅有细胞培养液）、姜黄素组（5μmol/L的姜黄素溶液）,紫杉醇组（0.125μmol/L的紫杉醇溶液）,联合用药组（5μmol/L的姜黄素+0.125μmol/L的紫杉醇溶液）,分别作用A549细胞和L-02细胞48 h后,应用流式细胞凋亡实验检测两种细胞各组的细胞凋亡情况;（3）对于按上述分组干预过的A549细胞,采用Western blotting检测各组细胞中STAT3、Bcl-2、Bax相关蛋白的表达水平;（4）对于按上述分组干预过的L-02细胞,采用ELASE法检测各组L-02细胞上清液中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）的浓度。结果:1、CCK-8实验结果显示:（1）姜黄素和紫杉醇对A549细胞均具有细胞增殖抑制作用,且呈浓度依赖性;与单一用药组相比较,联合用药组对A549细胞的增殖抑制更加明显（p<0.05）;（2）紫杉醇对L-02细胞亦有增殖抑制作用,且随着药物浓度的不断增加,其对L-02细胞的增殖抑制率也增加;然而,与同等剂量紫杉醇组相比,联合用药组对L-02细胞的增殖抑制率明显降低（p<0.05）;2、流式细胞术检测实验结果显示:（1）与空白对照组比较,姜黄素组和紫杉醇组对A549细胞凋亡率显着增高（p<0.05）,而联合用药组较单用药组的细胞凋亡效果更加明显（p<0.05）;（2）紫杉醇组对L-02细胞凋亡率显着高于空白对照组（p<0.05）,但是联合用药组的细胞凋亡率明显低于同等剂量的紫杉醇组（p<0.05）;3、Western blotting结果显示:与空白对照组相比较,姜黄素组、紫杉醇组的A549细胞中STAT3、Bcl-2表达降低,Bax表达显着升高（p<0.05）;而联合用药组与单药组相比,其A549细胞中STAT3、Bcl-2表达更低,Bax表达明显较高（p<0.05）;4、ELASE法检测ALT、AST结果显示:紫杉醇组L-02细胞上清液中ALT、AST浓度明显高于空白对照组,且结果具有显着性差异（p<0.05）;与相同剂量的紫杉醇组相比,联合用药组细胞上清液中ALT、AST的浓度显着降低（p<0.05）。结论:（1）姜黄素与紫杉醇均对A549细胞有增殖抑制和促进凋亡的作用,且均表现出浓度依赖性,低剂量姜黄素与紫杉醇联合作用较单用药更加明显,提示二者在抑制A549细胞增殖和促进凋亡方面具有协同作用,且二者对A549细胞的凋亡作用机制可能与下调STAT3、Bcl-2,上调Bax有关。（2）紫杉醇对L-02肝细胞具有增殖抑制和促进凋亡的作用,且随着药物浓度的升高,效果越明显,与低剂量姜黄素与紫杉醇联合用药组相比,等剂量紫杉醇组作用L-02细胞后的细胞增殖抑制和促进凋亡作用更明显,且其上清液中ALT、AST浓度较联合用药组明显升高,这表明低剂量姜黄素能够减轻紫杉醇所致的肝损伤。
黄晓伟[8]（2019）在《藤龙补中颗粒抑制CT26大肠癌生长和转移作用及机制》文中认为目的:研究藤龙补中颗粒（Teng-Long-Bu-Zhong granules,TLBZG）治疗CT26大肠癌生长和转移作用及机制。方法:实验研究共分成两部分。第一部分,用CT26大肠癌细胞建立皮下BALB/c小鼠模型,待肿瘤组织长至可测量范围时,根据肿瘤体积大小将小鼠按照随机原则分成对照组、5-氟尿嘧啶组（5-Fu）、复方斑蝥胶囊组、TLBZG组、5-Fu+复方斑蝥组胶囊、5-Fu+小剂量TLBZG组、5-Fu+中剂量TLBZG组、5-Fu+大剂量TLBZG组,给予无菌水、复方斑蝥胶囊、不同剂量TLBZG灌胃或和5-Fu腹腔注射治疗;每3天用电子卡尺测量肿瘤最大长径与横径一次。治疗2周后取血用流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+T细胞和NK细胞。治疗3周后处死小鼠,剥离肿瘤称重。分别用TUNEL法、β-半乳糖酶染色法、Western blot和免疫组化法、ELISA法检测细胞凋亡、细胞衰老、蛋白表达、细胞因子。第二部分,BALB/c小鼠尾静脉注射CT26细胞建立肺转移模型,根据体重大小将小鼠按照随机原则分成对照组、5-Fu组、复方斑蝥胶囊组、TLBZG组、5-Fu+复方斑蝥胶囊组、5-Fu+小剂量TLBZG组、5-Fu+中剂量TLBZG组、5-Fu+大剂量TLBZG组,给予无菌水、复方斑蝥胶囊、不同剂量TLBZG灌胃或和5-Fu腹腔注射治疗;治疗3周后处死小鼠,取肺称重,计算肺表面转移结节数量。HE染色法观察肺组织转移情况。免疫组化法和Western blot法检测蛋白表达和磷酸化。结果:第一部分:TLBZG可以抑制CT26肿瘤生长;下调PI3K和AKT磷酸化,活化Caspase-3、8和9,促PARP剪辑,诱导细胞凋亡;上调p16和p21相关基因表达,抑制RB磷酸化,降低E2F1靶基因CDK2和Cyclin-E1表达,促进细胞衰老;下调HIF1α表达,降低VEGF表达,抑制血管生成;升高CD3+、CD4+、CD8+T细胞和NK细胞,升高IL-4、IL-12和IFN-γ水平。藤龙补中颗粒同时可增强5-Fu的治疗作用。第二部分:TLBZG可以降低肺表面转移结节和肺质量。藤龙补中颗粒可以抑制Wnt/β-catenin及其下游靶基因MMP-2与MMP-9表达。藤龙补中颗粒可增强化疗的治疗作用。结论:1.藤龙补中颗粒能够抑制CT26大肠癌细胞的生长和转移,并提高化疗效果。2.藤龙补中颗粒可以诱导CT26大肠癌细胞凋亡,其机制与下调PI3K和降低AKT磷酸化以及活化Caspases-3、8和9,促PARP剪辑有关。3.藤龙补中颗粒可以促进CT26大肠癌细胞衰老,其机制与上调p16和p21,下调RB磷酸化以及抑制E2F1靶基因CDK2和Cyclin-E1表达有关。4.藤龙补中颗粒可以抑制CT26大肠癌血管生成,其机制与抑制HIF1α-VEGF信号转导相关。5.藤龙补中颗粒可以增强大肠癌荷瘤小鼠免疫功能,其机制与升高CD3+、CD4+、CD8+T细胞和NK细胞以及升高IL-4、IL-12和IFN-γ水平有关。6.藤龙补中颗粒能够抑制CT26大肠癌细胞肺转移,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路表达及其下游靶基因MMP-2和MMP-9的表达有关。
钱芳芳[9]（2019）在《金复康组分诱导人肺腺癌循环肿瘤细胞凋亡清除“伏毒”的分子机制研究》文中指出目的筛选金复康口服液和肺癌治疗常用中药的有效单体;明确金复康组分重楼皂苷Ⅶ对肺癌发病核心病机“正虚伏毒”中“伏毒”的重要组成部分——循环肿瘤细胞（CTC-TJH-01）凋亡的作用机制;初步探索重楼皂苷Ⅶ联合紫杉醇对CTC-TJH-01增殖的影响。方法1.采用CCK-8细胞增殖实验,检测金复康口服液和肺癌治疗常用中药含有的单体化合物:重楼皂苷Ⅶ、熊果酸、蟾毒灵、姜黄素、黄芪甲苷Ⅳ对CTC-TJH-01、H1975、16HBE细胞增殖的影响,评估五种中药单体对肺癌细胞毒作用,从中筛选出最佳中药单体化合物。2.采用流式细胞术、β-半乳糖苷酶染色法检测最佳中药单体化合物重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975细胞株的细胞周期、衰老和凋亡的影响,探索金复康组分重楼皂苷Ⅶ干预CTC-TJH-01和H1975细胞的作用途径。3.采用流式细胞术检测金复康组分重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975细胞线粒体膜电位和细胞内caspase 3/8/9的水平的影响;通过激光共聚焦显微镜观察重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975细胞核及DNA损伤的影响。采用Western Blot检测重楼皂苷Ⅶ干预CTC-TJH-01和H1975后凋亡相关蛋白的变化。探索重楼皂苷Ⅶ诱导CTC-TJH-01和H1975细胞凋亡的分子机制。4.采用CCK-8细胞增殖实验检测不同浓度配比的重楼皂苷Ⅶ联合紫杉醇对CTC-TJH-01细胞毒性作用,评估重楼皂苷Ⅶ联合紫杉醇对CTC-TJH-01细胞增殖的抑制作用是否具有协同效应。结果1.重楼皂苷Ⅶ、熊果酸、蟾毒灵和姜黄素均具有抑制CTC-TJH-01和H1975细胞增殖的作用（P<0.05）,随着作用时间延长和药物浓度增加,对细胞增殖的抑制作用逐渐增强。黄芪甲苷Ⅳ对CTC-TJH-01和H1975细胞增殖无显着影响。2.重楼皂苷Ⅶ可将CTC-TJH-01和H1975细胞增殖阻滞在G1期（P<0.05）,并诱导其发生凋亡（P<0.001）;重楼皂苷Ⅶ可以诱导CTC-TJH-01和H1975细胞线粒体膜电位降低（P<0.05）;重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975细胞衰老并无显着作用。重楼皂苷Ⅶ能够诱导CTC-TJH-01细胞核皱缩,核内DNA损伤;未观察到重楼皂苷Ⅶ对H1975细胞核影响。3.重楼皂苷Ⅶ能显着上调CTC-TJH-01和H1975细胞内caspase3/8/9的表达（P<0.05）。重楼皂苷Ⅶ可以显着上调CTC-TJH-01细胞内PARP1、γ-H2AX、TNF-R1和DR5蛋白的表达（P<0.05）,并下调XIAP和survivin的表达（P<0.05）;重楼皂苷Ⅶ可以显着上调H1975细胞内TNF-R1、DR5、Bax的表达（P<0.05）,能够显着下调Bcl-2、XIAP、survivin的表达（P<0.05）。4.重楼皂苷Ⅶ与紫杉醇以不同比例联用时,对CTC-TJH-01细胞增殖的毒性作用有差异,当按照摩尔浓度比例为（重楼皂苷Ⅶ:紫杉醇）=（2:1）联用时,其对CTC-TJH-01增殖的抑制作用具有协同效应。结论1.金复康组分重楼皂苷Ⅶ可以抑制CTC-TJH-01和H1975增殖;将细胞周期阻滞在G1期,并诱导其发生凋亡。2.重楼皂苷Ⅶ主要通过死亡受体介导的DNA损伤通路诱导CTC-TJH-01细胞发生凋亡,而通过死亡受体介导的线粒体通路诱导H1975细胞发生凋亡。3.当按照摩尔浓度比例为重楼皂苷Ⅶ:紫杉醇=2:1联合应用时,重楼皂苷Ⅶ和紫杉醇对CTC-TJH-01增殖的抑制作用具有协同效应。
杨斯洋[10]（2019）在《沙参麦冬汤含药血清联合顺铂对人肺癌A549细胞及E-cadherin和Snail表达的影响》文中研究指明目的:研究沙参麦冬汤含药血清联合顺铂对人肺腺癌A549细胞的抑制作用及其相关因子E-cadherin蛋白和Snail蛋白表达的影响。材料与方法:采用血清药理学的方法制备含药血清,随机将40只SD大鼠分为空白血清组和沙参麦冬汤（高、中、低）含药血清组,进行灌胃给药每日1次,连续给药7天后提取含药血清,检测沙参麦冬汤含药血清对A549细胞的抑制率,计算出沙参麦冬汤最佳用药剂量及最佳用药时间。分组为:空白组（Control）、中药组（沙参麦冬汤含药血清组;SSM）、顺铂组（Cisplatin）、联合用药组（沙参麦冬汤含药血清+顺铂西药组;SMM+Cisplatin）。MTT法检测对A549细胞的抑制率,免疫组化化学方法检测细胞中E-cadherin、Snail蛋白的表达,Western blot检测细胞中E-cadherin、Snail蛋白表达的影响。结果:1.沙参麦冬汤含药血清对A549细胞有明显的抑制作用,与时间和浓度呈依赖关系,10%中剂量的浓度含药血清48h作用强且细胞毒性低,对A549细胞有明显抑制作用,差异具有统计学意义（P<0.05）。2.沙参麦冬汤含药血清联合顺铂组作用于A549细胞的抑制率高于顺铂组,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.免疫细胞化学法和Western blot检测结果显示,沙参麦冬汤含药血清联合顺铂组与顺铂组比较,明显上调E-cadherin蛋白的表达,下调Snail蛋白的表达,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.沙参麦冬汤含药血清对人肺癌A549细胞具有抑制其生长作用。2.沙参麦冬汤含药血清联合顺铂对人肺癌A549细胞具有抑制其生长作用。3.沙参麦冬汤含药血清联合顺铂对人肺癌A549细胞,发现通过药物干预后,相关蛋白E-cadherin表达有所增加,Snail的表达有所减少。
二、姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡的实验研究（论文提纲范文）
（1）安五脂素通过调控let-7c-3p/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌发展（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1篇 综述 天然产物治疗肺癌的前景与争议 |
| 1 背景 |
| 2 按来源分类的抗肿瘤药物 |
| 2.1 来源于植物 |
| 2.2 来源于动物 |
| 2.3 来源于微生物 |
| 2.4 来源于海洋生物 |
| 3 抗肿瘤的机制 |
| 3.1 诱导凋亡 |
| 3.1.1 诱导ROS |
| 3.1.2 诱导内质网应激 |
| 3.1.3 通过线粒体途径诱导凋亡 |
| 3.2 诱导自噬 |
| 3.3 抑制PI3K/AKT途径 |
| 3.4 抑制NF-κB信号途径 |
| 3.5 阻滞细胞周期 |
| 3.6 调控表观遗传学 |
| 3.7 调控其他机制以及多种机制联合作用 |
| 4 天然产物使用的困境及解决方案 |
| 5 总结 |
| 第2篇 实验研究 |
| 第1章 ANW抑制NSCLC细胞生长和转移 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 仪器设备 |
| 1.1.2 试剂 |
| 1.2 细胞复苏及培养 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1CCK-8 实验测定细胞活力 |
| 1.3.2 成克隆实验 |
| 1.3.3 EDU实验 |
| 1.3.4 细胞流式实验 |
| 1.3.5 细胞划痕实验 |
| 1.3.6TRANSWELL实验 |
| 1.3.7 WESTERN BLOT |
| 1.3.8 统计学分析 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 ANW抑制NSCLC细胞的增殖 |
| 1.4.2 ANW抑制NSCLC细胞的侵袭和转移 |
| 1.4.3 ANW增强顺铂对NSCLC的抗肿瘤作用 |
| 1.5 结果讨论 |
| 第2章 ANW上调NSCLC细胞中的LET-7C-3P表达 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 仪器设备 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 引物序列 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 DEEP SEQUENCING检测细胞准备及RNA提取 |
| 2.2.2 LET-7C-3P靶基因预测 |
| 2.2.3 LET-7C-3P检测 |
| 2.2.4 构建及获取携带PIK3CA基因的慢病毒 |
| 2.2.5 MIRNAS转染A549和H460细胞 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告基因基因测定 |
| 2.2.7 WESTERN BLOT检测PI3K/AKT/MTOR信号通路相关蛋白表达 |
| 2.2.8 QRT-PCR检测PIK3CA MRNA水平 |
| 2.2.9 LET-7C-3P对NSCLC细胞的影响 |
| 2.2.10 统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 ANW上调NSCLC细胞中的MICRORNA HSA-LET-7C-3P |
| 2.3.2 ANW抑制NSCLC细胞中PI3K/AKT/MTOR信号通路 |
| 2.3.3 LET-7C-3P通过直接靶向PIK3CA来抑制PI3K/AKT/MTOR通路 |
| 2.3.4 LET-7C-3P可抑制NSCLC细胞增殖和转移 |
| 2.4 结果讨论 |
| 第3章 LET-7C-3P是ANW发挥抗NSCLC作用的必须靶点 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 仪器设备 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞分组 |
| 3.2.2 检测下调LET-7C-3P后细胞增殖 |
| 3.2.2 检测下调LET-7C-3P后细胞侵袭和转移 |
| 3.2.3 细胞流式实验检测下调LET-7C-3P后细胞凋亡 |
| 3.2.4 WESTERN BLOT检测下调LET-7C-3P后细胞内相关蛋白表达 |
| 3.2.5 建立裸鼠异种移植模型及分组 |
| 3.2.6 苏木素-伊红(H&E)染色 |
| 3.2.7 统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 抑制LET-7C-3P可以抵消ANW的抗NSCLC细胞增殖作用 |
| 3.3.2 抑制LET-7C-3P可以抵消ANW的抗NSCLC细胞转移和侵袭作用 |
| 3.3.3 抑制LET-7C-3P可以抵消ANW的促NSCLC细胞凋亡作用 |
| 3.3.4 裸鼠异种移植模型证实了ANW通过上调LET-7C-3P发挥抗肿瘤作用 |
| 3.4 结果讨论 |
| 第4章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的的科研成果 |
| 致谢 |
（2）大豆苷元诱导肺癌A549细胞凋亡及其相关机制的研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 文献综述 |
| 1.1 肺癌的研究进展 |
| 1.2 肺癌的发病机制 |
| 1.2.1 性别因素 |
| 1.2.2 吸烟 |
| 1.2.3 环境污染因素 |
| 1.2.4 饮食习惯因素 |
| 1.3 肺癌的治疗方法 |
| 1.3.1 手术治疗 |
| 1.3.2 化学治疗 |
| 1.3.3 放射治疗 |
| 1.3.4 分子靶向治疗 |
| 1.4 细胞凋亡和相关信号通路 |
| 1.4.1 细胞凋亡 |
| 1.4.2 活性氧簇 |
| 1.4.3 MAPK信号通路 |
| 1.4.4 STAT3 信号通路 |
| 1.4.5 NF-κB信号通路 |
| 1.5 大豆苷元(DAI)及其药理活性 |
| 1.5.1 抗骨质疏松 |
| 1.5.2 心脑血管保护作用 |
| 1.5.3 降血脂作用 |
| 1.5.4 抗癌作用 |
| 1.5.5 雌激素样作用 |
| 1.6 目的及意义 |
| 1.7 技术路线 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 肺癌细胞系及正常细胞系 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 细胞的传代培养及体外扩增 |
| 2.3 CCK-8 实验 |
| 2.4 Hoechst33342 染色法 |
| 2.5 流式细胞术(FCM) |
| 2.6 线粒体膜电位(JC-1)检测法 |
| 2.7 活性氧(ROS)水平检测 |
| 2.8 蛋白质免疫印迹法(western blot) |
| 2.9 细胞划痕实验 |
| 2.10 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 细胞存活率结果分析 |
| 3.2 DAI对A549 细胞的凋亡作用的分析 |
| 3.2.1 Hoechst33342/PI染色法观察细胞凋亡情况 |
| 3.2.2 AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡数量 |
| 3.2.3 JC-1 染色法检测细胞线粒体膜电位变化 |
| 3.2.4 DAI对细胞凋亡蛋白表达量的影响 |
| 3.3 DAI对人肺癌A549 细胞周期调控机制 |
| 3.4 DAI对人肺癌A549 细胞内MAPK/NF-κB/STAT3 凋亡相关信号通路的调控机制 |
| 3.5 DAI调控ROS水平诱导人肺癌A549 细胞凋亡 |
| 3.5.1 FCM检测DAI对 A549 细胞内ROS水平的影响 |
| 3.5.2 FCM检测DAI对人正常肝L-02 细胞内ROS水平的影响 |
| 3.5.3 FCM检测ROS积累对A549 细胞凋亡的影响 |
| 3.6 DAI抑制人肺癌A549 细胞迁移作用 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）凋亡在中医药治疗肝癌中的作用研究（论文提纲范文）
| 1 细胞凋亡 |
| 1.1 凋亡的概念 |
| 1.2 凋亡的早期形态学特征及变化 |
| 1.3 凋亡发生的分子机制 |
| 2 凋亡与肿瘤 |
| 3 中医药通过凋亡发挥抗肿瘤作用的研究 |
| 4 中药通过凋亡发挥抗肝癌的研究 |
（4）姜黄素对非小细胞肺癌细胞活性及上皮间质转化的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1. 非小细胞肺癌及其治疗 |
| 2. 姜黄素 |
| 2.1 姜黄素的结构及性质 |
| 2.2 姜黄素的毒性 |
| 2.3 姜黄素的药理活性 |
| 3. 上皮间质转化(EMT) |
| 第一部分 姜黄素对NSCLC细胞活性的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 主要试剂及耗材 |
| 1.2 主要设备 |
| 1.3 细胞系 |
| 1.4 主要溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞复苏 |
| 2.2 细胞传代 |
| 2.3 MTT实验 |
| 2.4 计算及统计 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 姜黄素对三种NSCLC细胞活性抑制率 |
| 3.2 半数抑制浓度IC50 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 姜黄素对非小细胞肺癌上皮间质转化的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 主要试剂及耗材 |
| 1.2 主要设备 |
| 1.3 细胞系 |
| 2 实验过程 |
| 2.1 培养、复苏、传代 |
| 2.2 CoCl_2制备EMT转化的NSCLC细胞 |
| 2.3 Transwell侵袭实验 |
| 2.4 细胞划痕试验 |
| 2.5 RT-PCR |
| 2.6 Werstern blot |
| 2.7 计算及统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 CoCl_2诱导的EMT转化的NSCLC细胞 |
| 3.2 Transwell侵袭实验实验结果 |
| 3.3 姜黄素细胞划痕试验结果 |
| 3.4 姜黄素对NSCLC细胞EMT相关基因表达的影响 |
| 3.5 Western blot结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 非小细胞肺癌上皮间质转化的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 姜黄素治疗肿瘤研究进展 |
| 参考文献 |
| 主要符号说明 |
| 致谢 |
（5）赤芍总苷抗肝肿瘤药效物质分析及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 赤芍本草考证及赤芍研究进展 |
| 第一节 赤芍本草考证 |
| 第二节 赤芍化学成分和药理作用的研究进展 |
| 第三节 赤芍总苷抗肝癌疗效研究 |
| 第二章 赤芍总苷的提取纯化及化学成分表征研究 |
| 第一节 赤芍总苷提取工艺研究 |
| 第二节 赤芍总苷纯化工艺研究 |
| 第三节 赤芍、赤芍总苷抗肝肿瘤作用比较研究 |
| 第四节 基于液质联用技术赤芍总苷化学成分表征研究 |
| 第五节 基于分子网络的赤芍总苷化学成分可视化分析 |
| 第六节 小结 |
| 第三章 赤芍总苷体内、外抗肝肿瘤药效学研究 |
| 第一节 赤芍总苷体外抗肝肿瘤作用研究 |
| 第二节 赤芍总苷体内抗肝肿瘤作用研究 |
| 第三节 赤芍总苷对H22荷瘤小鼠血清细胞因子的影响 |
| 第四节 小结 |
| 第四章 赤芍总苷作用机制初步研究 |
| 第一节 基于网络药理学的赤芍总苷抗肝癌分子机制研究 |
| 第二节 赤芍总苷对人肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响 |
| 第三节 赤芍总苷介导PI3K/Akt信号通路抗肝肿瘤作用研究 |
| 第四节 赤芍总苷介导MEK/ERK信号通路抗肝肿瘤作用研究 |
| 第五节 小结 |
| 第五章 赤芍总苷对大鼠细胞色素P450酶的影响及肝毒性评价 |
| 第一节 细胞色素P450酶的研究概况 |
| 第二节 赤芍总苷对大鼠P450酶亚型的活性影响 |
| 第三节 赤芍总苷对大鼠P450酶亚型mRNA表达的影响 |
| 第四节 赤芍总苷对大鼠血清细胞因子的影响 |
| 第五节 小结 |
| 分析讨论 |
| 结论 |
| 创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 综述 |
| 赤芍总苷药理作用的研究进展 |
| 中药抗肿瘤作用机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成绩 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（6）席夫碱—过渡金属配合物的合成及抗肿瘤活性和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1 癌症疾病简介 |
| 2 癌细胞凋亡途径 |
| 3 抗癌药物特异性靶点 |
| 4 Pt类抗癌药物研究及应用 |
| 5 席夫碱及其金属配合物抗癌研究 |
| 5.1 席夫碱及其金属配合物的类型 |
| 5.2 席夫碱及其过渡金属配合物的抗癌活性 |
| 6 本论文的研究目的、选题依据和研究思路 |
| 6.1 研究目的 |
| 6.2 选题依据 |
| 6.3 研究思路 |
| 参考文献 |
| 第二章 席夫碱及其金属配合物的合成及结构表征 |
| 1 引言 |
| 2 实验部分 |
| 2.1 实验仪器 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 6-甲基-2-吡啶甲醛苯甲酰腙及其过渡金属配合物的合成及表征 |
| 2.4 2-喹啉甲醛苯甲酰腙及其过渡金属配合物的合成及表征 |
| 2.5 2-吡啶缩氨基硫脲及其铜(Ⅱ)配合物合成表征 |
| 2.6 2-羟基-1-萘甲醛苯甲酰腙及其Pt(Ⅱ)配合物的合成及表征 |
| 2.7 2-羟基-1-水杨醛苯甲酰腙-Pt(Ⅱ)配合物的合成及表征 |
| 3 配合物(C1-C21)在溶液中的稳定性实验 |
| 3.1 配合物C1-C3的稳定性 |
| 3.2 配合物C4-C6的稳定性 |
| 3.3 配合物C7-C11的稳定性 |
| 3.4 配合物C12-C16的稳定性 |
| 3.5 配合物C17-C21的稳定性 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 席夫碱配体及其金属配合物的体外抗肿瘤活性研究 |
| 1 引言 |
| 2 实验部分 |
| 2.1 实验仪器及试剂 |
| 2.2 储备液及实验中溶液的配制 |
| 2.3 细胞复苏及培养 |
| 2.4 配体及配合物的细胞毒性测定 |
| 2.5 细胞对配合物的摄取实验 |
| 2.6 细胞周期分析 |
| 2.7 细胞内ROS的观察 |
| 2.8 线粒体膜电位(Δψm)的检测 |
| 2.9 细胞凋亡检测 |
| 2.10 细胞形态分析 |
| 2.11 细胞迁移试验 |
| 2.12 抑制肿瘤球体生长 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 配体及配合物体外对肿瘤细胞的抑制率 |
| 3.2 肿瘤细胞吸收配合物及分布研究 |
| 3.3 配合物对肿瘤细胞周期的影响 |
| 3.4 配合物对细胞内活性氧的影响 |
| 3.5 配合物对细胞线粒体膜电位的影响 |
| 3.6 配合物诱导细胞凋亡 |
| 3.7 配合物C17和C19对A549cisR细胞形态的影响 |
| 3.8 配合物C17和C19对A549cisR细胞迁移的影响 |
| 3.9 配合物C17和C19对A549cisR细胞球的影响 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 席夫碱金属配合物体外抗肿瘤机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 实验部分 |
| 2.1 实验仪器及试剂 |
| 2.2 模拟分子对接 |
| 2.3 紫外-可见光谱研究配合物与CT-DNA作用研究 |
| 2.4 荧光光谱研究配合物与CT-DNA作用研究 |
| 2.5 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.6 蛋白印迹法研究相关蛋白的表达 |
| 2.7 Caspase-3/9表达的测定 |
| 2.8 TRAP银染实验 |
| 3 实验结果与讨论 |
| 3.1 DNA对接结果 |
| 3.2 紫外-可见光谱研究配合物与DNA作用实验结果 |
| 3.3 荧光光谱研究配合物与CT-DNA相互作用实验结果 |
| 3.4 琼脂糖凝胶电泳 |
| 3.5 配合物对周期相关蛋白的影响 |
| 3.6 配合物对凋亡相关蛋白的影响 |
| 3.7 配合物对Caspase-3/9的影响 |
| 3.8 配合物调控c-myc和hTERT蛋白的表达 |
| 3.9 配合物对端粒酶活性的影响 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 攻读博士期间发表的相关论文 |
| 致谢 |
（7）姜黄素提高紫杉醇对A549细胞的敏感性及减轻肝损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要英文缩写索引 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 研究目的和意义 |
| 1.3 实验设计思路 |
| 第二章 实验材料及方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 主要药物及试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 CCK-8检测姜黄素和紫杉醇二者单用和联用对A549细胞及L-02细胞增殖抑制率的影响 |
| 2.2.3 AnnexinV/PI检测姜黄素和紫杉醇二者单用和联用对A549细胞及L-02细胞凋亡的影响 |
| 2.2.4 Western Blotting检测姜黄素和紫杉醇二者单用和联用对A549细胞中STAT3、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平 |
| 2.2.5 ELISA检测姜黄素和紫杉醇二者联用对L-02 细胞上清液中AST、ALT的浓度 |
| 2.3 统计学处理 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 姜黄素和紫杉醇单用及联合应用对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响 |
| 3.1.1 姜黄素对A549细胞增殖的影响 |
| 3.1.2 紫杉醇对A549细胞增殖的影响 |
| 3.1.3 姜黄素联合紫杉醇对A549细胞增殖的影响 |
| 3.1.4 姜黄素、紫杉醇单独和联合用药对A549 细胞凋亡的影响 |
| 3.1.5 姜黄素、紫杉醇单独和联合用药对A549细胞中STAT3、Bcl-2、Bax表达的影响 |
| 3.2 姜黄素和紫杉醇单用及联合应用对正常肝细胞L-02细胞增殖和凋亡的影响 |
| 3.2.1 姜黄素联合紫杉醇对L-02细胞增殖的影响 |
| 3.2.2 姜黄素联合紫杉醇对L-02细胞凋亡的影响 |
| 3.2.3 姜黄素联合紫杉醇对L-02细胞上清液中AST、ALT浓度的影响 |
| 第四章 实验讨论 |
| 第五章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 硕士在读期间发表的论文及参加的课题研究 |
| 致谢 |
（8）藤龙补中颗粒抑制CT26大肠癌生长和转移作用及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略语对照表 |
| 引言 |
| 1.第一部分藤龙补中颗粒对大肠癌肿瘤生长作用 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 细胞株 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验药品准备 |
| 1.2.2 细胞培养 |
| 1.2.3 皮下移植瘤动物模型及治疗 |
| 1.2.4 细胞凋亡检测 |
| 1.2.5 Caspases活性检测 |
| 1.2.6 细胞衰老检测 |
| 1.2.7 免疫细胞检测 |
| 1.2.8 免疫因子检测 |
| 1.2.9 Western Blot |
| 1.2.10 免疫组化法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 1.4 结果 |
| 1.4.1 TLBZG对大肠癌生长影响 |
| 1.4.2 TLBZG对大肠癌细胞凋亡作用及机制 |
| 1.4.2.1 TLBZG对大肠癌细胞凋亡作用 |
| 1.4.2.2 TLBZG对大肠癌细胞Caspases活性影响 |
| 1.4.2.3 TLBZG对 PARP剪辑作用 |
| 1.4.2.4 TLBZG对 PI3K-AKT信号转导作用 |
| 1.4.3 TLBZG对大肠癌细胞衰老作用及机制 |
| 1.4.3.1 TLBZG对大肠癌细胞衰老作用 |
| 1.4.3.2 TLBZG对 p16和p21 表达作用 |
| 1.4.3.3 TLBZG对 RB-E2F1 作用 |
| 1.4.3.4 TLBZG对 E2F1 靶基因表达作用 |
| 1.4.4 TLBZG对大肠癌血管生成及相关基因表达影响 |
| 1.4.4.1 TLBZG对大肠癌血管生成影响 |
| 1.4.4.2 TLBZG对 VEGF表达影响 |
| 1.4.4.3 TLBZG对 HIF1α表达影响 |
| 1.4.5 TLBZG对大肠癌荷瘤鼠免疫功能影响 |
| 1.4.5.1 TLBZG对大肠癌荷瘤小鼠免疫器官影响 |
| 1.4.5.2 TLBZG对大肠癌荷瘤小鼠CD3+T细胞影响 |
| 1.4.5.3 TLBZG对大肠癌荷瘤小鼠CD4+T 细胞影响 |
| 1.4.5.4 TLBZG对大肠癌荷瘤小鼠CD8+T 细胞影响 |
| 1.4.5.5 TLBZG对大肠癌荷瘤小鼠NK细胞影响 |
| 1.4.5.6 TLBZG对大肠癌荷瘤小鼠细胞因子影响 |
| 2.第二部分TLBZG大肠癌肺转移作用 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 实验药品准备 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 建立尾静脉模型 |
| 2.2.4 HE染色 |
| 2.2.5 Western blot检测 |
| 2.3 统计学分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 TLBZG对大肠癌转移影响 |
| 2.4.2 TLBZG对大肠癌转移灶MMPs表达影响 |
| 2.4.3 TLBZG对大肠癌转移灶Wnt3和β-catenin表达影响 |
| 3.分析与讨论 |
| 3.1 中医对大肠癌的认识 |
| 3.2 现代医学对大肠癌的认识 |
| 3.3 藤龙补中汤 |
| 3.4 藤龙补中颗粒对细胞凋亡作用机制 |
| 3.5 藤龙补中颗粒对细胞衰老作用机制 |
| 3.6 藤龙补中颗粒对血管生成作用机制 |
| 3.7 藤龙补中颗粒对免疫功能作用机制 |
| 3.8 藤龙补中颗粒对肿瘤转移作用机制 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录一 :文献综述 中医药对大肠癌多药耐药作用及机制* |
| 参考文献 |
| 附录二 :在校期间发表论文 |
| 附录三 :其余发表论文 |
| 附录四 :参加学术会议 |
（9）金复康组分诱导人肺腺癌循环肿瘤细胞凋亡清除“伏毒”的分子机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 基于人肺腺癌循环肿瘤细胞系筛选最佳中药单体 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试剂 |
| 2.1.2 仪器与耗材 |
| 2.1.3 细胞株 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 细胞复苏 |
| 2.2.2 细胞传代 |
| 2.2.3 细胞冻存 |
| 2.2.4 药物毒性试验 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 第二部分 重楼皂苷Ⅶ干预人肺腺癌循环肿瘤细胞增殖研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试剂 |
| 2.1.2 仪器与耗材 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 细胞周期的影响 |
| 2.2.2 流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 细胞凋亡的影响 |
| 2.2.3 重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 衰老的影响 |
| 2.2.4 Hoechst33258 染色实验检测重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-和H1975细胞凋亡的影响 |
| 2.2.5 TUNEL法检测重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 细胞凋亡的影响 |
| 2.2.6 重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 细胞线粒体膜电位的影响 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 细胞周期的影响 |
| 3.2 流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 细胞凋亡的影响 |
| 3.3 重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 衰老的影响 |
| 3.4 Hoechst33258 染色实验检测重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01 和H1975细胞凋亡的影响 |
| 3.5 TUNEL检测重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 细胞凋亡的影响 |
| 3.6 重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 细胞线粒体膜电位的影响 |
| 第三部分 重楼皂苷Ⅶ诱导人肺腺癌循环肿瘤细胞凋亡的分子机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试剂 |
| 2.1.2 仪器与耗材 |
| 2.1.3 抗体 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 重楼皂苷Ⅶ对CTC和 H1975 caspase3/8/9 的影响 |
| 2.2.2 western blot法检测重楼皂苷Ⅶ对CTC和 H1975 凋亡相关蛋白的影响 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 细胞caspase3/8/9 表达的影响 |
| 3.2 重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 细胞DNA损伤相关蛋白表达的影响 |
| 3.3 重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975 细胞凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.4 重楼皂苷Ⅶ诱导CTC-TJH-01和H1975 凋亡的分子机制 |
| 第四部分 重楼皂苷Ⅶ联合紫杉醇对人肺腺癌循环肿瘤细胞增殖的影响初探 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试剂与耗材 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 药物毒性试验 |
| 2.2.3 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 讨论 |
| 1 历代对肺癌的记载 |
| 1.1 春秋战国时期,确立病名和基本原则 |
| 1.2 汉唐时期确立治法方药 |
| 1.3 宋金元时期,强调扶正 |
| 1.4 明清时期,分期治疗,攻补兼施 |
| 1.5 近现代,融汇中西,扶正治癌 |
| 2 中医药防治肺癌的成就与挑战 |
| 2.1 进入综合治疗体系,对手术、放化疗的作用 |
| 2.2 作用特点:增强免疫功能,提高生活质量,延长生存期 |
| 2.3 挑战:早期患者增多,晚期患者疗效遇到瓶颈 |
| 3 “正虚伏毒”病机观点的提出 |
| 4 伏毒的提出及临床价值 |
| 4.1 伏毒的临床表现及特征 |
| 4.2 伏毒的生物学基础 |
| 4.3 CTC为肺癌伏毒的主要组成部分 |
| 4.4 扶正蠲毒为肺癌重要治则之一 |
| 4.5 金复康组分重楼皂苷Ⅶ的相关研究及本研究的发现 |
| 4.5.1 重楼皂苷Ⅶ抗肿相关研究内容 |
| 4.5.2 重楼皂苷Ⅶ诱导CTC凋亡及其分子机制 |
| 4.5.3 重楼皂苷Ⅶ可与紫杉醇协同发挥抑瘤作用 |
| 5 展望 |
| 5.1 体外研究平台的优化 |
| 5.2 给药方式的改善与创新 |
| 5.3 不同单体联合,中西医药物的协同 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 重楼皂苷的抗肿瘤作用机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 在校期间发表学术论文 |
| 获得奖励 |
| 参加学术会议情况 |
| 掌握的实验技术 |
（10）沙参麦冬汤含药血清联合顺铂对人肺癌A549细胞及E-cadherin和Snail表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
四、姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡的实验研究（论文参考文献）
- [1]安五脂素通过调控let-7c-3p/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌发展[D]. 文婷婷. 吉林大学, 2021(01)
- [2]大豆苷元诱导肺癌A549细胞凋亡及其相关机制的研究[D]. 翟雨晴. 黑龙江八一农垦大学, 2021(09)
- [3]凋亡在中医药治疗肝癌中的作用研究[J]. 姚晓云,钭方芳. 实用癌症杂志, 2020(06)
- [4]姜黄素对非小细胞肺癌细胞活性及上皮间质转化的影响[D]. 张敏. 苏州大学, 2020(02)
- [5]赤芍总苷抗肝肿瘤药效物质分析及作用机制研究[D]. 范冰冰. 辽宁中医药大学, 2020(01)
- [6]席夫碱—过渡金属配合物的合成及抗肿瘤活性和机制研究[D]. 邓俊刚. 广西师范大学, 2019(04)
- [7]姜黄素提高紫杉醇对A549细胞的敏感性及减轻肝损伤的实验研究[D]. 任静. 江苏大学, 2019(03)
- [8]藤龙补中颗粒抑制CT26大肠癌生长和转移作用及机制[D]. 黄晓伟. 上海中医药大学, 2019
- [9]金复康组分诱导人肺腺癌循环肿瘤细胞凋亡清除“伏毒”的分子机制研究[D]. 钱芳芳. 上海中医药大学, 2019
- [10]沙参麦冬汤含药血清联合顺铂对人肺癌A549细胞及E-cadherin和Snail表达的影响[D]. 杨斯洋. 辽宁中医药大学, 2019(02)